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CD45RA抗體是研究免疫細(xì)胞亞群的關(guān)鍵工具，尤其在區(qū)分T細(xì)胞功能狀態(tài)（原始T細(xì)胞與記憶T細(xì)胞）中具有核心作用：

T細(xì)胞亞群鑒定

CD45RA與CD45RO互補(bǔ)表達(dá)：原始T細(xì)胞（Na?ve T cells）高表達(dá)CD45RA，而記憶T細(xì)胞（Memory T cells）表達(dá)CD45RO。通過(guò)聯(lián)用CD3/CD4/CD8抗體，可明確T細(xì)胞的功能亞群。

應(yīng)用實(shí)例：在HIV/AIDS研究中，CD45RA/CD45RO聯(lián)用可追蹤C(jī)D4+ T細(xì)胞亞群的耗竭與恢復(fù)，評(píng)估免疫狀態(tài)。

B細(xì)胞與單核細(xì)胞標(biāo)記

CD45RA在正常B細(xì)胞和B細(xì)胞淋巴瘤（如濾泡性淋巴瘤）中高表達(dá)，是B細(xì)胞分型的重要標(biāo)志。

單核細(xì)胞中部分亞群也表達(dá)CD45RA，但其功能意義尚待深入探索。

CD45RA抗體在血液腫瘤的鑒別診斷中具有重要價(jià)值：

淋巴瘤分型

B細(xì)胞淋巴瘤：CD45RA高表達(dá)于大多數(shù)B細(xì)胞淋巴瘤（如濾泡性淋巴瘤），而T細(xì)胞淋巴瘤通常為CD45RO陽(yáng)性。

白血病亞型分析：CD45RA可區(qū)分白血病B細(xì)胞系（如Raji細(xì)胞）與其他血液腫瘤細(xì)胞。

腫瘤微環(huán)境研究

通過(guò)免疫組化（IHC）檢測(cè)腫瘤組織中CD45RA+淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，可評(píng)估抗腫瘤免疫反應(yīng)的強(qiáng)度。

CD45RA參與免疫信號(hào)通路的調(diào)控，其抗體用于探索以下機(jī)制：

Src家族激酶調(diào)控

CD45RA通過(guò)去磷酸化激活Lck、Fyn等激酶，增強(qiáng)T/B細(xì)胞受體（TCR/BCR）信號(hào)傳導(dǎo)。

細(xì)胞生存與凋亡

通過(guò)整合素信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞存活，并在凋亡過(guò)程中參與DNA碎片化。

細(xì)胞因子信號(hào)調(diào)節(jié)

抑制JAK激酶活性，調(diào)控IL-2、IFN-γ等細(xì)胞因子的信號(hào)傳導(dǎo)。

CD45RA表達(dá)變化與多種疾病相關(guān)，其抗體用于以下研究：

感染性疾病

丙型肝炎（HCV） ：CD45RA+ T細(xì)胞比例變化與慢性炎癥狀態(tài)相關(guān)。

HIV感染：監(jiān)測(cè)CD45RA+原始CD8+ T細(xì)胞的恢復(fù)情況，評(píng)估抗病毒治療效果。

免疫缺陷疾病

CD45功能障礙與嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷（SCID）相關(guān)，抗體用于模型動(dòng)物的免疫表型分析。

CD45RA抗體廣泛用于多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)，需根據(jù)應(yīng)用優(yōu)化條件：

多色標(biāo)記策略：推薦使用APC-Cy7、PE-Cy7等高靈敏度熒光染料，避免藍(lán)色染料（如CF?405S）因低熒光強(qiáng)度導(dǎo)致背景干擾。

補(bǔ)償控制：使用BD CompBeads時(shí)需注意光譜差異，部分染料（如BUV661）需克隆特異性補(bǔ)償。

樣本處理：全血樣本需溶血處理（如BD FACS Lysing Solution），固定細(xì)胞需優(yōu)化抗體濃度（≤1.0 μg/10?細(xì)胞）。

石蠟切片處理：需脫蠟和抗原修復(fù)（高pH EDTA緩沖液），推薦陽(yáng)性對(duì)照為扁桃體組織。

抗體稀釋：濃縮抗體建議1:200稀釋，室溫孵育30分鐘。

分子量檢測(cè)：CD45RA在WB中顯示205-220 kDa條帶，需通過(guò)敲除實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證特異性。

ELISA定量：雙抗體夾心法檢測(cè)小鼠CD45RA，靈敏度達(dá)25 ng/mL，需避免反復(fù)凍融樣本。

免疫沉淀（IP） ：用于研究CD45RA與其他信號(hào)蛋白（如整合素）的相互作用。

細(xì)胞內(nèi)染色（ICC） ：需透膜處理（如Triton-X），聯(lián)用細(xì)胞表面標(biāo)記（如CD3）增強(qiáng)特異性。

克隆與物種特異性

常用克?。篐I100（人源）、4KB5（人源）、OX-33（大鼠B細(xì)胞特異性）。

物種適用性：人、大鼠、小鼠、犬和非人靈長(zhǎng)類抗體均有商業(yè)化產(chǎn)品。

實(shí)驗(yàn)優(yōu)化策略

濃度滴定：流式細(xì)胞術(shù)中活細(xì)胞推薦0.25 μg/10?-10?細(xì)胞，固定細(xì)胞需降低濃度。

封閉劑選擇：使用5% BSA或同源血清封閉非特異性結(jié)合，添加0.1% Triton-X增強(qiáng)封閉效果。